L’Electrophorèse
1) Définition : il s’agit de déplacement des particules en fonction de leurs charges dans un champ électrique à un courant continue « la séparation à base de la charge électrique ». Cette technique a un ensemble hétérogène des particules chargées électriquement dont la séparation dit : Séparation électrophorique. Il existe plusieurs types d’électrophorèse.
2) Principe : les particules migrent vers l’ectode respectif dont celles qui sont chargées positivement dite Cathions migrent vers la Cathode « la charge négative du cham », et celles qui sont négatives appelées Anions migrent vers l’Anode « la charge positive du champ », et celles qui sont neutres restent au point de dépôt « le milieu, on parle d’une charge nette ». La charge de molécules « principalement les protéines, les peptides, AA » ont des chaines latérales contenant des groupes fonctionnelles responsables de la charge de la molécule.
3) Les facteurs influençant la migration :
A. Le pH du tampon : il détermine la nature de la particule mais le plus important la charge de la particule, il est à considérer surtout lorsque les substances sont Ampholytes « Amphotères », et aussi pour les protéines sériques dont le pH est inférieur à 7,2 qui se place au milieu alcalin à pH = 8,6.
B. La force ionique du tampon :elle varie généralement en fonction de la solution tampon.
C. La température :doit être maintenu pendant toute la durée de la manipulation.
D. Le champ électrique :il doit être continu et constant, son intensité doit être faible afin d’éviter l’échauffement.
E. La durée :les particules se déplacent avec une vitesse constante, le déplacement sera plus grand lorsque l’électrophorèse dure longtemps. L’augmentation du temps de l’électrophorèse n’améliore pas la séparation car la diffusion devient plus importante et la résolution de l’électrophorogramme risque d’être comprise.
F. La force de freinage :il y a un courant se produisant dans le sens inverse du courant de l’électrophorèse appelé : Electro-endosmose. La viscosité du milieu est également un facteur de freinage important surtout pour les macromolécules « protéines ».
Les supports de l’électrophorèse peuvent être de : gel, papier, acétate de cellulose….
A. La préparation du support
B. Dépôt de l’échantillon.
C. Migration électrophorique.
D. Fixation et coloration des substances.
E. Caractérisation et détermination quantitatives des fractions séparées.
5) Les résultats :exprimées par des bondes de migration, celles-ci peuvent être comparées et identifiées par rapport à d’autre bonde témoin.
6) Domaine d’application :il est très vaste, on peut pour la séparation des protéines sériques, AA,…. La seule condition est que les produits à séparer doivent être chargés électriquement.
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